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范玮琪好听的歌:标题酶联免疫吸附测定法原理

奥布利昂 www.njjlb.cn    

提供者:上海劲马实验设备有限公司    发布时间:2019/7/5   阅读次数:65次 >>进入该公司展台
 酶联免疫吸附测定法原理【】
酶联免疫吸附测定法( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA )于1971年由Engvall和Perlmann创建成功,成为继免疫荧光和放射免疫之后又一具有重大意义和深远影响的免疫技术。该技术利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性,将抗原-抗体特异性反应固定于固相载体表面进行,同时结合酶对底物的高效催化作用而产生高灵敏度的实验技术。由于酶的高效生物催化作用,一个酶分子在数分钟内可以催化几十或几百个底物分子发生反应,产生了放大效应,使得原来微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被检测出来,因此可成功应用于标本中微量物质含量的测定。

双抗体夹心法(检测未知抗原)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ guoye。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

间接法(检测未知抗体)
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃guoye。次日洗涤3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)

3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

上海劲马实验设备有限公司于2010年成立,专注生命科学和生物医学领域多年,是集研发、生产、销售于一体的新型高科技公司。我司为各大高校,科研单位、医院、制药与诊断试剂生产厂家等客户提供多种生物学检测试剂盒,酶联免疫试验代测、酶联免疫试剂盒、TSZelisa试剂盒、原装elisa试剂盒、elisa试剂盒实验代测、进口常规生化试剂、抗体、化学试剂、药典级试剂、标准品、血清等产品,覆盖分子生物学、生物化学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物制药与诊断试剂研发生产等领域。经过多年的高速发展,我们先后取得了BIM、ABCAM、RD、TSZ、SIGMA、GIBCO、SPECTRUM、AMRESCO、HYCLONE、NQBB等众多品牌的中国区的代理。
 

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